Общие методы изолирования.
Используются при нецеленаправленном исследовании биоматериал.
50,0-100,0 биоматериала измельчают и заливают абсолютным этанолом, подкисляя щавелевой или винно-каменной кислотой до рН=2-3. Перемешиваем и проверяем значение рН, настаиваем при комнатной температуре в течение суток при периодическом перемешивании и проверяем значение рН. Жидкую фазу сливаем, операцию повторяем 2-3 раза (в течение 2-3 суток), затем биоматериал помещаем на фильтр и промываем спиртом; спиртовые вытяжки объединяют и упаривают на водяной бане при 40-50°С до густоты сиропа. Сиропообразную жидкость обрабатывают этанолом до прекращения выпадения осадка, жидкость фильтруют, снова упаривают до густоты сиропа и вновь осаждают белки. Остаток обрабатывают 20-25 мл воды, осадок отфильтровывают, проводят экстракцию хлороформа (203 порции), получают кислое хлороформное извлечение. Водную фазу подщелачивают 25% раствором NH4OH до рН=9-10, извлекают хлороформом (2-3) порции, получают щелочное хлороформное извлечение.
1. Для подкисления используют органические кислоты для избежания гидролиза сложноэфирных, амидных и других связей.
2. Для подщелачивания берут только NH4OH т.к. при использовании NaOH будут образовываться феноляты, ХР в воде.
1. Данный метод является общим, им можно извлечь большую группу ТВ.
2. Извлечение получается чистым, можно работать с несвежим биоматериалом.
3. Этанол является универсальным растворителем и извлекает большое количество ТВ.
1. Метод чрезвычайно длительный (7-10 рабочих дней).
2. Большое количество осаждений молекул приводит к потере ТВ.
3. Этанол является дорогостоящими растворителем.
50-100,0 биоматериала измельчают и заливают водой, подкисляя щавелевой или винно-каменной кислотой и настаивают при комнатной температуре в течение 1 часа, перемешивают, проверяют значение рН, вытяжку фильтруют, центрифугируют и экстрагируют хлороформом (трижды) – осторожно, во избежание эмульгирования с водой. Водную фазу подщелачивают 20% NaOH и трижды экстрагируют хлороформом.
1. Быстро (в течение 1 рабочего дня).
3. Почти отсутствуют потери ТВ из-за многократной очистки вытяжки.
1. Вода является не универсальным растворителем. Извлечение содержит большое количество балластных веществ, возможно образование эмульсии на этапе экстракции. Нельзя использовать с несвежим биоматериалом.
Частные методы изолирования:
Применяют при целенаправленно исследовании биоматериала.
На производные барбитуровой кислоты – метод Валова .
Биоматериал измельчают (50-100,0) и заливают 80 мл воды + 20 мл 10%NaOH, настаивают 0,5 часа при периодическом перемешивании. Извлечение сливают, центрифугируют, к центрифугату добавляют 120 мл 10% раствора вольфрамата натрия и 1М H2SO4 до рН=2 (образуется вольфрамовая кислота, осаждает белки). Нагревают и кипятят 20 минут, центрифугируют, центрифугат переносят в делительную воронку и проводят извлечение эфиром. К эфирному слою добавляют 50 мл 10%NaOH, водную фазу отделяют, добавляют 25%H2SO4 до рН=2 и вновь извлекают эфиром (метод реэкстракции). Настаивание производят в щелочной воде, т.к. барбитураты образуют соли.
1.Хороший выход извлечения барбитуровой кислоты.
2. Недорого, недлительно.
3. Вытяжка получается чистой
1. Частный метод (для других ТВ большие потери).
50-100,0 биоматериала измельчают, прибавляют 80 мл 0,01М H2SO4 до рН=2-3, перемешивают, проверяют рН, настаивают 2 часа, водную вытяжку сливают, процедуру повторяют 2 раза, водные вытяжки объединяют и центрифугируют, очищают от примесей гель-хроматографией. Колонка «Сефадекс», «Д25». Элюат – концентрируют хлороформом.
1. Частный метод.
2. Чистая вытяжка.
1. Дороже, т.к. необходима чистка для колонки хроматографа.
50-100,0 биоматериала измельчают и заливают 0,02М раствором H2SO4 до рН=2,5 (гидролиз алкалоидов не происходит, а извлечение лучше), настаивают 2 часа при периодическом перемешивании, проверяют рН. водный слой процеживают. Операцию проводят 2 раза. Водную вытяжку объединяют, центрифугируют, добавляют сульфат аммония до насыщения (высаливание α-белков), центрифугируют, и извлекают эфиром 2-3 раза. К водной фазе прибавляют небольшими порциями раствор NaOH 20% (водная фаза содержит (NH4)2SO4 + NaOH à NH4OH, которым и происходит подщелачивание) до рН=9-10 и экстрагируют эфиром или хлороформом.
1. Частный метод ля алкалоидов, для синтетических веществ основного характера.
3. Вытяжка получается чистая.
1. Для веществ кислого характере – плохо. Для некоторых групп алкалоидов – плохое извлечение.
На производные фенотиазина – метод Соломатина .
Биоматериал измельчают и заливают абсолютным этанолом, подкисляют щавелевой кислотой до рН=2-3 (оксалаты фенотиазина ХР в этаноле), настаивают 2 часа, вытяжку сливают, операцию повторяют 3 раза, обхединенную вытяжку упаривают на водяной бане до густоты сиропа. белки осаждаются абсолютным этанолом (смотри метод Стаса-Отто), спиртовую вытяжку упаривают досуха и растворяют в воде. Нагревают до 40-50°С, осадок отфильтровывают и проводят экстракцию эфиром 2 раза при рН=2-3. Возможно определение веществ кислого характера. Водную фазу подщелачивают до рН=13, и извлекают эфиром 2-3 раза. Эфирное извлечение обрабатывают водой, подкисляют 0,5М H2SO4, часть водной вытяжки хранят или используют для СФМ, частично вновь экстрагируют эфиром из щелочной среды и исследуют химическими методами.
(Производные фенотиазина в сухом виде быстро окисляются, поэтому их хранят в сернокислой среде).
Изолирование веществ из биожидкостей.
Проводят прямую жидкость-жидкость экстракцию.
К биожидкости (кровь, моча, промывные воды) с определенным значение рН (2-3 или 9-10) и затем экстрагируют органическим растворителем (хлороформ, эфир). В качестве очистки для крови используют высаливание (NH4)2SO4 или вольфраматом Na + H2SO4.
В моче – проводят реэкстракцию.
Если вещество подвергается метаболизму и в моче находится в виде глюкуронидов или сульфатов, проводят кислотный (производные 1,4-бензодиазепина) или ферментный (морфин) гидролиз. Или выполняют восстановление дитионитом натрия N-оксидов (морфин).
В качестве биожидкости может быть использована желчь.
Метод Груцхарди. Для бензонала, наксерона.
– Конец работы –
Эта тема принадлежит разделу:
Токсикология наука изучающая свойства ядовитых веществ вызываемые ими патологические изменения в организме и эффективные средства для лечения и. Судебная токсикология раздел судебной медицины изучающий отравления. Токсическая химия наука изучающая методы выделения и ядовитых веществ из различных объектов и методы их обнаружения.
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Общие методы изолирования.
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
Все темы данного раздела:
Организация судебно-медицинской службы.
Судебно-медицинская служба – единая государственная служба в системе 30, служит целям и задачам правосудия. Деятельность направлена на содействие учреждениям 30, улучшение качества медицинской помо
Порядок оказания помощи при острых отравлениях
Отделения центов по лечению ОО: 1. Реанимация 2. Токсикологический отдел. 3. Биохимическая лаборатория. 4. Токсикологическая лаборатория. Большая роль н
ПУТИ ПОСТУПЛЕНИЯ ЯДОВ В ОРГАНИЗМ, ТОКСИКОКИНЕТИЧЕСКИЕ КОНСТАНТЫ
1. Ингаляционные. Вещества в газообразном, парообразном или пылеобразном состоянии. Вещества быстро поступают в кровь, что связано с большим легочных альвеол (100-150 м3), хорошим кровообр
Распределение яда.
ТВ и метаболиты транспортируются кровью, в основном ТВ образуют комплексы с белками (альбуминаты), связи непрочные, ионные, водородные. Иногда – прочные соединения: ТМ ковалентно связываются с белк
Токсикокинетические константы.
Токсикокинетическая модель развития отравления: 1. Одночасная (для сосудистого пути поступления яда). Введение – кровь – выведение.
ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ СИМПТОМЫ ПРИ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ, МЕТОДЫ ДЕТОКСИКАЦИИ
Диагностика острых отравлений: 1. Анамнез – сбор сведений, беседа с пострадавшим, результаты осмотра места происшествия, беседа со свидетелями, с бригадой
Факторы, влияющие на развитие отравления
I. Основные факторы, зависящие от ТВ, 1. Физико-химические свойства яда. 2. Токсическая доза и концентрация в биологической среде. 3. Характер связи с субстратом.
ГАЗОЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ.
Метод основан на распространении анализируемых веществ между неподвижными жидкими фазами и инертным газом. Перенос вещества происходит из-за различной растворимости компонентов смеси в жидкой фазе,
Определение рН среды
Для исследования используют б/ж или водную вытяжку из б/м. Для получения водн вытяжки небольшое кол-во б/измельчают, встряхивают с небольшим колич-вом воды. Надосадочную жидкость сливают и исследую
Особенности изолирования некоторых летучих ядов.
Фенол и спирты C3-C5 – необходима пробоподготовка. Реакции на фенол: с бромной водой и FeCl3. Мешают органические спирты и кислоты. К дистилляту добавляют NaHCO3, с которым кислоты образую
Синильная кислота и ее соли, Метиловый спирт.
1. Токсикологическое значение: Используют в металлургии для выделения драгоценных металлов из руды, в производстве ювелирных изделий. 2. Действие на организм: LD50HCN – 1мг/кг, NaCN – 3мг/
Метиловый спирт.
Прозрачная жидкость, легко смешивается с водой и органическими растворителями. Трудно отличимая от этанола. 1. Токсикологическое значение: используют как растворитель, для получения формал
Этанол.
1. Токсикологическое значение. По смертности на 1 месте. Широко применяется в промышленности, в пищевой промышленности, медицине, в лабораториях, в парфюмерии. 2. Действие на организм. Ток
Изоамиловый спирт, Этиленгликоль, Уксусная кислота
Токсикологическое значение: применяют в промышленности (растворитель), в пищевой промышленности (растворитель), для получения ЛП (пары амилнитрита – при отравлении). В качестве изомера – 2 метилбут
Этиленгликоль
Подвижная жидкость, хорошо смешивается с водой, используется в качестве антифриза. Смертельная доза 200-300 мл. Отравления: потеря сознания, судороги, отеки легких, падение артериального д
Ацетон, Фенол, Хлорированные углеводороды, дихлорэтана
Токсикологическое значение: в промышленности, в химчистках. Яд наркотического действия. Метаболизируют до CO2. Может быть обнаружен у людей, страдающих СД. На исследование: головн
Хлорированные углеводороды.
Хлороформ, четыреххлористый углерод, хлоралгидрат, дихлорэтан Токсикологическое значение: широко применяются в быту, в промышленности. Действуют на ЦНС, наблюдается почечная и печ
Высшие спирты. Формальдегид.
Перед качественным анализом проводят пробоподготовку: К дистилляту + эфир, фильтруют ч/з безводный Na2SO4 в сухую выпарительную чашку. Испаряют эфир при комнатной температуре. С сухим оста
Формальдегид.
1) С резорцином в щелочной среде – розовое или малиновое окрашивание Также как у хлороформа (“-“ СХЗ) 2) С аммиачным раствором AgNO3 – серый осадок или “серебрянное зеркало”
ВЕЩЕСТВА, ИЗОЛИРУЕМЫЕ МЕТОДОМ МИНЕРАЛИЗАЦИИ
Яды, имеющие судебно-медицинское значение: Ba, Cr, Zn, Tl, Mn, Cu, Ag, Pb, Hg, Bi, Cd, As, Sb, Sn, Ni. Металлические яды попадают в организм главным образом per os, через к
Обнаружение катионов в минерализате.
Катионы могут быть обнаружены как систематическим, так и дробным методом. Систематический: последовательное выделение групп ионов, затем разделение на подгруппы, затем обнаружение их в под
Анализ вещественных доказательств.
Таблетки. Описание: внеш вид, размер, цвет, оболочка, насечка, форма. Изол-е: изм-т, + воду, переносят в делит-ю воронку, подкисл-т до pH = 2, экстр-т х/ф, отд-т, фильтр-т ч/з б/водн Na2SO4
Анализ ЛРС.
Схема иссл-я: 1. внешний вид сырья (макро- и микро-), 2. изолирование: ЛРС изм-т, зал-т водой, подк-т H2SO4 до рН=2-2,5. Наст-т 30 минут при период перемеш-и, фильтр-т в делит вор
Тетраэтилсвинец. Pb(C2H5)4
Антидетонатор в двигателях внутреннего сгорания; воздействует на все отд. Hb, изм. каратина крови; галлюцинации, бессонница, головокружение. Изолирование: 1. Метод дистилляции. Би
Этилмеркурхлорид C2H5HgCl
Используется в сельском хозяйстве. Изолирование: настаивание с концентрированной HCl недостаточно. Жидкость фильтруют и проводят экстракцию хлороформом. Идентификация: хлороформно
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ВЕЩЕСТВА. Общие методы изолирования.
ЛВ (официально ЛП и наркотические средства) 1) Кислотного характера (производные барбитуровой кислоты, салициловой кислоты, некоторые снотворные). 2) Вещества нейт
Бензодиазепины
Сибазон - Sibazonum (Диазепам, Седуксен, Валиум) 7-хлор-5-фенил-1-метил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-он. ЛФ - табл. растворы
ДИМЕДРОЛ
β-диметил-аминоэтилового эфира tox значение – п/гист-й преп-т д/леч-я крапивницы, разл-х фо
Антипирин, амидопирин, анальгин
1. с р-ром FeCl3: антипирин – красное окр-е, амидопирин – фиол-е, исчезающее при избытке р-ва, анальгин – синее à крас à исчез. 2. с азотистой к-той: антипирин – зеленое окр-
АЛКАЛОИДЫ ПРОИЗВОДНЫЕ ТРОПАНА
Токсическое значение: при язвенной болезни, бронх.астме, в глазной практике, скополамин как противорвотно
ВЕЩЕСТВА, ИЗОЛИРУЕМЫЕ ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБЪЕКТОВ НАСТАИВАНИЕМ С ВОДОЙ С ПОСЛЕДУЮЩИМ ДИАЛИЗОМ.
Соляная кислота, Серная кислота, Азотная кислота. Уксусная кислота, Щавелевая. Щелочи: едкие и карбонатные Мин.соли: нитриты, нитраты, гипохлораты, хлорат
СЕРНАЯ КИСЛОТА
Изолирование – диализ. Из вещ доков проводят прямую экстракцию этанолом. Т.к. tкип кислоты очень ↑ à для повышения её летучести переводят медными опилками в сернистый ангидрид
АЗОТНАЯ КИСЛОТА
Изолирование: диализат подвергается перегонке досуха в присутствии Cu опилок: 2HNO3 + 3Cu à 2NO + 3CuO + H2O 6HNO3 + 3CuO à 3 Cu(NO3)2 + 3 H2O 2NO + O2 &agr
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРБОКСИГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ
СО не требует специальных методов изолирования, работают с мышечной тканью в случае пожара (нет крови) или с кровью. Образуется при неполном сгорании древесины, м.б. обнаружен в выхлопных
Производные дитиофосфорной кислоты
КАРБОФОС Токсическое действие на организм: Основные симптомы из-за нарушения действия А
Хлорофос и дихлофос.
Метаболитом хлорофоса явл дихлофос (гидролиз в кислой или щелочной среде). Дихлофос метаболизируется до диалкилфосфорной к-ты и дихлоруксусного альдегида.
Метафос
Оказывает действие на ХЭ, но также характерно образование MetHb. Изолирование: Б/м изме
Карбофос
Инсектицид и арборецид Угнетает АХЭ, но возможно активность проявляют продукты метаболизма. Метаболизируются до кислородных производных:
ЗАДАЧКИ
1. Фосфид цинка Zn3P2 Прим-ся в кач-ве ср-ва дератизации в виде паст, tab, а также пищевые продукты с ним. Это темно-серый порошок, н/р в во
Больше информации по теме: http://allrefs.net
