Справочник химика 21
Химия и химическая технология
Вирусы цветная проба
Цветная проба. первоначально разработанная на модели вирусов полиомиелита и сыгравшая большую роль в изучении этого возбудителя, в настоящее время все шире применяется для изучения других вирусных инфекций, [c.161]
Выявление по цветной пробе. Принцип данного теста заключается в следующем. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного ) становится оранжевым. При заражении культуры клеток такими ци-топатогенными вирусами, как энтеровирусы или реовирусы, метаболизм клеток подавляется, pH среды и ее цвет не изменяются (она остается красной). [c.266]
Одним из вариантов PH является цветная проба (колориметрическая реакция нейтрализации). При положительном результате противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток, и под действием кислых метаболитов последних в среде меняется цвет индикатора. В пробирки вносят по 0,25 мл рабочего разведения вируса (100—1000 ЦПД50) и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30 — 60 мин, добавляют в каждую пробирку по 0,25 мл клеточной суспензии и закрывают их резиновыми пробками или заливают стерильным вазелиновым маслом. Пробирки помещают в термостат на 6 —8 дней при 37 С. Результаты реакции учитывают колориметрически pH 7,4 и выше указывает на репродукцию вируса, 7,2 и ниже — на нейтрализацию вируса антителами. [c.271]
Высокая стоимость обезьян, трудоемкость процессов. связанных с получением культур почечного эпителия обезьян, и нередкая их зараженность, а также и других подопытных животных латентными вирусами побудили исследователей использовать для постановки цветной пробы перевиваемые клетки. В настоящее время с этой целью предложены клетки HeLa, СОЦ, КВ, Нер-2 и клетки карциномы Эрлиха. [c.159]
Многие авторы подчеркивают, что главная трудность проведения цветной реакции с клетками HeLa состоит в правильном подборе среды. При применении сред. которые используют для размножения клеток, уровень метаболизма очень высок. поэтому сдвиг pH в кислую сторону происходит до того, как разовьется патогенное действие вируса. Было предложено несколько различных по составу сред для постановки цветной пробы с клетками HeLa. Общими для этих сред являются pH, близкий к 8,0 и способность поддерживать обмен клеток при таком значении pH. [c.159]
В опытах сравнительного титрования вируса полиомиелита I типа (штамм Бруиден) Л, Г, Степановой было установлено, что клетки HeLa обладают относительно низкой чувствительностью (титр 10 —10 ТЦДбо/мл). Более высокие титры получены при использовании для цветной пробы почечных клеток макаки резус [c.160]
Титры вирусов, установленные с помощью цветной пробы, были, как цравило, ниже титров, определявшихся по цитопатогенному действию. Клетки амниона человека оказались более чувствительными к вирусам Коксаки по сравнению с клетками HeLa и КВ. [c.161]
Гош и Янгнер (Gaush, Jonngner, 1959) предложили применять цветную пробу для титрования вирусов гриппа разных типов и для определения нейтрализующей активности гриппозных сывороток, Авторы использовали для работы клетки почек обезьян. Они показали, что титр, вычисленный по результатам цветной пробы. обычно на 0,56 единицы логарифма ниже по сравнению с результатами титрования во вращающихся пробирках. Метод цветной пробы позволил обнаружить четкие антигенные различия между щтаммами вирусов гриппа свиней, гриппа А, А2 и В. Была также показана пригодность этого метода для серодиагностики гриппа по нарастанию титра вируснейтрализующих антител в парных сыворотках больных. Отмечена высокая степень корре- [c.161]
Реакция цветной пробы получила широкое распространение как основной метод изучения иммунологической структуры насе-ления в отношении трех типов вируса полиомиелита. Проведение таких исследований явилось основной предпосылкой оценки эф фектнБНости массовой иммунизации населения инактивированной и живой вакциной против полиомиелита по серологическим сдвигам. [c.162]
ПОИСК
Больше информации по теме: http://chem21.info
